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膝骨关节炎患者关节液中miR-140-3p表达可反映骨关节炎进程


中国组织工程研究 第 20 卷 第 35 期

2016–08–26 出版
August 26, 2016 Vol.20, No.35

Chinese Journal of Tissue Engineering Research

·研究原著·

膝骨关节炎患者关节液中miR-140-3p表达可反映骨关节炎进程
殷春明 ,潘晓华 ( 暨南大学第二临床医学院,深圳市人民医院,广东省深圳市 外科及矫形骨科,广东省深圳市 518100)
1 2 1

518020; 南方医科大学附属深圳宝安医院创伤

2

引用本文: 殷春明, 潘晓华. 膝骨关节炎患者关节液中 miR-140-3p 表达可反映骨关节炎进程[J].中国组织工程研究, 2016, 20(35): 5277-5283. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.35.016 文章快速阅读:
膝关节液中 miR-140-3p 相对表达量与骨关节炎严重程度的相关性
骨关节炎早、中、晚期患者

ORCID: 0000-0003-3732-5119(潘晓华)

收集各组膝关节液,置于液氮中保存

殷春明, 男, 1988 年生, 江西省赣州市人,汉族, 暨南大学第二临床医学 院在读硕士, 主要从事骨 关节外科的基础与临床 研究。 通讯作者: 潘晓华, 博士, 主任医师, 教授, 博士生 导师, 南方医科大学附属 深圳宝安医院创伤外科 及矫形骨科, 广东省深圳 市 518100
中图分类号:R318

荧光定量 PCR 检测各标本中 miR-140-3p 的表达

随着骨关节炎严重程度的增加,miR-140-3p 在膝关节液中的表达量呈相对减少的趋势

骨关节炎患者关节液中 miR-140-3p 的表达量可以在一定程度上反映骨关节炎病程的进展

文题释义: 关节软骨的营养:来源于滑液的渗透,关节软骨与关节滑液之间存在一定的物质交换。与血液和尿液相 比,关节液成分及量的变化更能反映关节内组织病变的发生和发展。 miR-140-3p:其为 pre-miR-140 转录而来的单链小分子 RNA,其不编码蛋白质,但可在转录后调控基 因表达,影响蛋白质的翻译,参与机体各种重要的生理和病理过程。

文献标识码:B 文章编号:2095-4344 (2016)35-05277-07 稿件接受:2016-06-13

摘要
背景:骨关节炎是一种与年龄相关,以关节软骨退变为特点的关节疾病。 目的:检测膝关节液中 miR-140-3p 的表达,明确其表达量是否与骨关节炎严重程度相关。 方法:共收集到健康志愿者、痛风性关节炎患者、类风湿性关节炎患者各 10 例,膝骨关节炎患者 45 例, 其中骨关节炎早期、 中期、 晚期各 15 例。 应用实时荧光定量 PCR 检测各组膝关节液中 miR-140-3p 的表达。 结果与结论:①骨关节炎组 miR-140-3p 的表达明显下调,非骨关节炎组与骨关节炎组间表达量差异有 显著性意义(P < 0.05), 健康对照组、 痛风性关节炎与类风湿性关节炎组间差异无显著性意义(P > 0.05); ②健康对照组 miR-140-3p 的表达量是骨关节炎组的 11.4 倍,随骨关节炎严重程度的增加 miR-140-3p 表达量呈相对减少的趋势;③进一步行 Spearman 等级相关分析显示:骨关节炎的严重程度与 miR-140-3p 的表达量均呈负相关;④结果表明,关节液中 miR-140-3p 的表达量可以在一定程度上反 映骨关节炎病程的进展。 关键词:

骨科植入物;关节植入物;骨关节炎;膝骨关节炎;miRNA;miR-140;miR-140-3p;miR-140-5p; 关节液;荧光定量 PCR
主题词:

骨关节炎, 膝;滑液;微 RNAs;聚合酶链反应;组织工程
基金资助: 2013 年深圳市科技计划立项项目(JCYJ20130402101926968);2013 年深圳市国际合作项目 (GJHZ20130418150248986)

ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R

CODEN: ZLKHAH

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殷春明,等. 膝骨关节炎患者关节液中 miR-140-3p 表达可反映骨关节炎进程
Yin Chun-ming, Studying for master’s degree, Second Clinical Medical College of Jinan University, Shenzhen People’s Hospital, Shenzhen 518020, Guangdong Province, China

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Expression of miR-140-3p in synovial fluid of knee osteoarthritis patients reflects the progression of osteoarthritis
Yin Chun-ming1, Pan Xiao-hua2 (1Second Clinical Medical College of Jinan University, Shenzhen People’s Hospital, Shenzhen 518020, Guangdong Province, China; 2Department of Orthopedics and Traumatology, BaoAn Hospital Affiliated to Southern Medical University, Shenzhen 518100, Guangdong Province, China)

Abstract
BACKGROUND: Osteoarthritis is an age-related joint disease characterized by articular cartilage degeneration. OBJECTIVE: To assess the expression of miR-140-3p in synovial fluid of knee osteoarthritis, and identify whether miR-140-3p levels in synovial fluid are correlated with disease severity. METHODS: We collected 10 healthy volunteers, 10 patients with gouty arthritis, 10 patients with rheumatoid arthritis, and 45 patients with knee osteoarthritis (15 cases in early stage, 15 cases in middle stage and 15 cases in the late stage). Real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect miR-140-3p expression in synovial fluid in each group. RESULTS AND CONCLUSION: (1) Expression of miR-140-3p was significantly down-regulated in knee osteoarthritis group. Significant differences in miR-140-3p expression were detected between non-knee osteoarthritis group and knee osteoarthritis group ( P < 0.05). No significant difference in miR-140-3p expression was determined among healthy control group, gouty arthritis group and rheumatoid arthritis group (P > 0.05). (2) The miR-140-3p expression in the healthy control group was 11.4 times that in the knee osteoarthritis group. The expression of miR-140-3p decreased with the increase of the severity of osteoarthritis. (3) Spearman rank correlation analysis suggested that the expression of miR-140-3p was negatively correlated with osteoarthritis severity. (4) Results suggest that the expression of miR-140-3p in synovial fluid can reflect the progression of knee osteoarthritis to a certain extent. Subject headings: Osteoarthritis, Knee; Synovial Fluid; MicroRNAs; Polymerase Chain Reaction; Tissue Engineering Funding: The Project of Science and Technology Department of Shenzhen City in 2013, No. JCYJ20130402101926968; the International Cooperation Project of Shenzhen City in 2013, No. GJHZ20130418150248986 Cite this article: Yin CM, Pan XH. Expression of miR-140-3p in synovial fluid of knee osteoarthritis patients reflects the progression of osteoarthritis. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2016;20(35):5277-5283.

Corresponding author: Pan Xiao-hua, M.D., Chief physician, Professor, Doctoral supervisor, Department of Orthopedics and Traumatology, BaoAn Hospital Affiliated to Southern Medical University, Shenzhen 518100, Guangdong Province, China

0 引言 Introduction
骨关节炎是一种慢性退行性关节病变,其发病率随 年龄的增长而增加,是一种中老年人常见的关节疾病。 骨关节炎特征性的表现是软骨细胞基质合成不足、关节 软骨退变、 骨赘形成和滑膜病变
[1-3]

如 dynamin1 及 NF-κB 等

[11-12]

。新近的研究却显示
[13]

miR-140-3p 与miR-140-5p 在骨关节炎软骨细胞中的表 达均下调,且二者表达量之间也存在差异
[14]

,在增殖的

软骨细胞中miR-140-3p比miR-140-5p处于更高的表达水 平 , 这就说明miR-140-3p也可能在骨关节炎发病进程中 发挥重要作用。 因此, 进一步展开miR-140-3p的研究对揭 示miR-140在骨关节炎发病进程中的作用具有重要意义。 关节软骨的营养来源于滑液的渗透,关节软骨与关 节滑液之间存在一定的物质交换;与血液和尿液相比, 关节液成分及量的变化更能反映关节内组织病变的发 生和发展
[15-16]

。 骨关节炎的发病机

制涉及到机体内多种生理、病理的复杂过程,确切机制 尚不清楚,其中关节软骨合成代谢和分解代谢功能的紊 乱,以及细胞外基质的降解是促进骨关节炎进展的关键 因素 。miR-140可以直接作用于IGFBP-5、MMP13和 ADAMTS5等基因
[5-7] [4]

,对软骨的稳态起调控作用。

miR-140由miR-140-3p和miR-140-5p组成, 二者均 由Pre-miR-140转录而来,但是它们却由不同的碱基序 列组成,并且调控不同的靶基因 。先前的研究认为, miR-140-5p 主 要 调 控 与 骨 关 节 炎 相 关 的 靶 基 因 , miR-140-5p 在 软 骨 细 胞 中 可 靶 向 作 用 于 HADC4 、 IGFBP5、ADAMTS5、Smad3、CXCL12、BMP2等基 因
[5-6,9-10] [8]

。 虽然有研究证实miR-140-3p在骨关节炎
[13]

患者关节软骨中表达下调

, 但miR-140-3p是否在骨关

节炎患者膝关节液中表达仍属未知。因此,对骨关节炎 患者关节液中miR-140-3p的表达进行检测, 比较分析骨 关节炎不同分期患者关节液中 miR-140-3p 表达的变化 情况, 明确miR-140-3p的表达量是否与骨关节炎严重程 度相关,为骨关节炎的早期诊断和治疗提供依据。
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。 miR-140-3p主要调控神经系统相关的靶基因

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1 对象和方法 Subjects and methods
1.1 1.2 1.3 设计 基因表达检测。 于2015年5月5日在深圳市人民医院 时间及地点 对象

孵育60 min,然后85℃孵育10 min灭活反转录酶。 1.5.3 定量PCR 检测 序列片段大小: 内参片段U6为 hsa-miR-140-3p 为 71 bp 94 bp , 目 的 片 段

完成。 按照美国风湿病学会 (ARA) 制定的诊断标
[17]

(MIMAT0004597),见表1。PCR反应总体积为20 ?L, 其中cDNA(1︰20)5.0 ?L,上游引物0.5 ?L,下游引物 0.5 ?L,2×SYBR Green qPCR SuperMix 10 ?L,dH2O 4.0 ?L。 反应条件为50 ℃ 2 min; 95 ℃ 2 min; 95 ℃ 15 s, 60 ℃ 32 s读板, 40个循环, 熔解曲线分析: 温度60-95 ℃, 每个样重复3次。
表 1 荧光定量 PCR 引物序列 Table 1 Primer sequences in quantitative fluorescence PCR
基因名称 hsa-miR-140-3p- F hsa-miR-140-3p-R U6-F U6-R 基因序列 ACA CTC CAG CTG GGA GGC GGG GCG CCG CGG GA CTC AAC TGG TGT CGT GGA CTC GCT TCG GCA GCA CA AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT

准,诊断为骨关节炎患者45例

。通过骨关节炎影像学

Kellgren-Lawrence Grading(KLG)检查再将骨关节炎患者 分为骨关节炎早期(KLG < 2)15例,骨关节炎中期(KLG= 2)15例,骨关节炎晚期(KLG > 2)15例。按ARA1987年制 定的类风湿关节炎(RA)诊断标准诊断为类风湿关节炎患 者10例
[18]

,按ARA1977年制定的痛风性关节炎(GA)诊断
[19]

标准,诊断痛风性关节炎患者10例

。试验过程中招募

健康志愿者10例。排除标准:膝关节有明确外伤史、手术 史、恶液质、类固醇注射史、肿瘤史、感染史。 经患者或健康志愿者知情同意后,经关节腔穿刺抽 取关节液置于无菌、无酶的冻存管,保存于液氮中。试 验经医院伦理委员会审批通过, 1.4 材料 高速冷冻离心机购自美国热电公司;各种 量程移液器购自德国Eppendorf公司;吸头、EP管、冻 存 管 、 PCR 管 购 自 美 国 Axygen 公 司 ; SYBR Green qPCR SuperMix 购自 Invitrogen 公司;实时荧光定量 PCR 仪购自 ABI 公司 ( 型号: PRISM
?

1.6 1.7
-

主要观察指标 统计学分析

miR-140-3p在各组膝关节液中的 所获得的数据均采用 SPSS13.0 软
[20]

相对表达量。 件进行处理, 膝关节液中miR-140-3p的相对表达量应用 2 ??Ct进行统计学分析 ,若资料满足方差齐性,采用单 因素方差分析或多组间多重比较分析法,若方差不齐, 则采用Tamhane’s T2检验进行组间比较分析。 骨关节炎 严 重 程 度 与 miR-140-3p 表 达 量 之 间 的 相 关 性 采 用 Spearman等级相关分析,检验水准α=0.05。

7500 Sequence

Detection System) ; Trizol 溶液购自 Invitrogen 公司; dNTP、RNase inhibitor、M-MLV购自Promega公司。 1.5 1.5.1 方法 总 RNA 抽提 取 300 μL 关节液,加入 4 倍体积

Trizol溶液,再加入200 μL氯仿,强烈振荡20 s后静置 3 min ; 使 用 珠 海 黑 马 TGL-16R 高 速 冷 冻 离 心 机 10 000×g离心15 min; 小心将上层水层移至另一个新的 无RNase的EP管中;加入10 μL SiO2吸附液,混匀, 8 000×g离心1 min;吸弃上清,加入体积分数为75%乙 醇400 μL, 8 000×g离心1 min; 吸弃上清, 风干15 min, 加入30 μL DEPC水溶解RNA。 1.5.2 反转录 采用茎环法进行反转录,取 10 μL 总 RNA置于无RNase的PCR管中混匀,85 ℃孵育5 min, 以打开RNA二级结构。随后立即置于冰上,以防止RNA 复性再次恢复二级结构; 在另一去RNase的PCR管中配 置含10 mmol/L dNTP 2.0 ?L,RNase inhibitor 0.5 ?L, miR-140-3p反转录引物0.5 ?L,miR-140-5p反转录引 物0.5 ?L,U6反转录引物0.5 ?L,5× buffer 4.0 ?L, M-MLV 0.5 ?L,DEPC水1.5 ?L的溶液,将配置好的溶 液加入至上述含10 ?L总RNA的PCR管中,混匀后42 ℃
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2
2.1

结果 Results
受试者数量分析 共收集到10例健康志愿者、10

例痛风性关节炎患者、10例类风湿关节炎患者、45例膝 骨关节炎患者关节液,其中骨关节炎早期、中期、晚期 各15例。各组研究对象的年龄、身高、体质量、体质量 指数等情况见表2。 2.2 基线资料比较 经方差分析显示,身高、体质量 及体质量指数在各组间差异无显著性意义(表3), 但年龄 在各组间的差异有显著性意义(F=3.73,P=0.005)。 2.3 miR-140-3p在各组膝关节液中相对表达量的分析 在健康对照组,类风湿关节炎组,痛风性关节炎组及骨 关节炎早、中、晚期组患者膝关节液中均能检测到 miR-140-3p的表达,扩增曲线如图1,经正态分布检验 (K-S检验)表明:miR-140-3p在各组膝关节液中的相对 表达量2 ??Ct均服从正态分布。
-

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表 2 各组研究对象基本情况 Table 2 General characteristics of the subjects in each group
组别 健康对照组 痛风性关节炎组 类风湿关节炎组 骨关节炎早期组 骨关节炎中期组 骨关节炎晚期组 n 10 10 10 15 15 15 年龄(岁) 49.60±8.82 50.00±12.56 46.90±12.75 51.07±9.31 58.00±11.98 63.20±8.40 身高(cm) 166.00±6.32 165.90±5.97 165.60±7.65 164.93±7.03 163.93±7.66 163.80±4.84 体质量(kg) 63.20±6.12 64.55±4.06 63.30±8.63 64.67±5.66 62.53±4.69 63.47±3.18 体质量指数(kg/m2) 22.91±1.39 23.49±1.72 23.03±2.12 23.77±1.44 23.32±1.75 23.69±1.56

_

(x± s)

表 5 miR-140-3p 在各组关节液中相对表达量差异比较 Table 5 Comparison of the difference of miR-140-3p expression in synovial fluid in each group fluid among groups
组别 健康对照组 痛风性关节炎组 类风湿关节炎组 骨关节炎早期组 骨关节炎中期组 骨关节炎晚期组 健康对照组 0.86 0.98 0.003 0.001 0.00 痛风性关节炎组 0.86 1.00 0.00 0.00 0.00 类风湿关节炎组 0.98 1.00 0.014 0.003 0.001 骨关节炎早期组 0.003 0.000 0.014 0.026 0.000 骨关节炎中期组 0.001 0.00 0.003 0.026 0.007 骨关节炎晚期组 0.00 0.00 0.001 0.000 0.007 -

表注:表中数值为 miR-140-3p 在各组关节液中相对表达量差异比较的 P 值,因相对表达量??Ct 在各组间方差不齐,故使用 Tamhane’s T2 检 验,检验水准 α=0.05。
_

表 3 各组基本情况差异比较 Table 3 Comparison of the difference of general characteristics among groups
项目 年龄 身高 体质量 体质量指数
a

表 4 miR-140-3p 在各组膝关节液中的相对表达量 (x± s) Table 4 Relative expression of miR-140-3p in synovial fluid of each group
组别 健康对照组 ?Ct 11.93±0.55 12.28±0.42 12.3±0.71 13.95±0.69 15.2±1.12 17.16±0.86 ??Ct -0.003±0.554 0.348±0.416 0.371±0.713 2.018±0.687 3.267±1.116 5.232±0.86 2-??Ct 1.07±0.43 0.82±0.24 0.86±0.39 0.274±0.13 0.132±0.086 0.031±0.019

Fa 3.73 0.27 0.31 0.52

Pb 0.005 0.93 0.91 0.76

痛风性关节炎组 类风湿关节炎组 骨关节炎早期组 骨关节炎中期组 骨关节炎晚期组

表注: :当资料满足方差齐性时使用单因素方差分析;当资料方差 不齐时,使用 Tamhane’s T2 检验,b:检验水准 α=0.05。

表注:?Ct=(目的基因 Ct-内参 Ct);??Ct=(待测样品中目的基因? Ct ?-参照样品中目的基因?Ct),选择正常对照组?Ct 的均数作为参照 进行计算;相对表达量=2-??Ct。

对健康对照组,类风湿关节炎组,痛风性关节炎组 及骨关节炎早、 中、 晚期组患者膝关节液中miR-140-3p、 miR-140-5p的相对表达量(表 4)行Levene法方差齐性检 验, 结果显示各组方差不齐(Levene Statistic=13.4, P< 0.05)。 进一步对 miR-140-3p 在各组关节液中的相对表达 量行Tamhane’s T2检验(表5),结果显示:miR-140-3p 表达量在健康对照组、痛风性关节炎组与类风湿关节炎 组间差异无显著性意义(P > 0.05);非骨关节炎组与骨 关节炎组间相对表达量差异有显著性意义(P < 0.05), 且 miR-140-3p 在非骨关节炎组中的表达量是骨关节炎 组的9.6 倍,健康对照组的表达量是骨关节炎组的 11.4 倍。miR-140-3p在骨关节炎早期、中期、晚期组间相对 表达量差异均有显著性意义(表5), 且随骨关节炎严重程
5280

度的增加miR-140-3p表达量呈相对减少的趋势(图2)。 将miR-140-3p在健康对照组,骨关节炎早、中、晚 期组间的相对表达量进一步行 Spearman 等级相关分 析, 结果显示Spearman等级相关系数r=-0.87, P=0.00。 按α=0.05水准, 可以认为miR-140-3p的表达量与骨关节 炎的严重程度间存在负相关关系。 2.4 miR-140-3p相对表达量与年龄的相关性分析 绘 制miR-140-3p在健康对照组、膝骨关节炎早、中、晚期 组中的相对表达量与年龄的散点图 (图 3)。由散点图可 见, miR-140-3p在膝关节液中的相对表达量与年龄间并 无明显的直线相关关系;将miR-140-3p在健康对照组、 膝骨关节炎早、中、晚期组中相对表达量与年龄的相关
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1.75 标准指示信号值减去基线信号值 0.7 0.5 0.3 0.1 -0.1 10 miR-140-3p 表达 15 20 25 30 35 40 1.50 1.25 1.00 0.75 0.50 0.25 0 -0.25 miR-140-3p 循环数 骨关节 正常对照组 痛风性 类风湿 骨关节 骨关节 关节炎组 关节炎组 炎早期组 炎中期组 炎晚期组

图 1 miR-140-3p 扩增曲线图 Figure 1
2.5 2.0 miR-140-3p 表达 1.5 1.0 0.5 0 35 40 45 50 55 60 65 年龄(岁) 70 75 80 85

图 2 miR-140-3p 在各组膝关节液中相对表达量示意图 Figure 2 group 图注:与健康对照组、痛风性关节炎组、类风湿关节炎组相比, miR-140-3p 在骨关节炎组的表达量明显下调, 并且随骨关节炎严 重程度增加,miR-140-3p 表达水平呈逐渐下调趋势。 miR-140-3p expression in the synovial fluid of each

Amplification curves of miR-140-3p

前已有部分研究表明年龄与 miRNA 表达之间具有一定相 关性
[28]

, 但是机体受环境因素、 遗传因素以及疾病复杂性
[25]

等的影响, 年龄与 miRNA 表达的具体相关性仍未明确



通过分析年龄与 miR-140 在健康对照组及骨关节炎各组 关节液中表达情况,结果可以发现,miR-140-3p 在膝关 节液中相对表达量与年龄之间无直线相关性。 因此可以认 为 miR-140-3p 在骨关节炎不同分期患者关节液中表达的 差异性并不是由于年龄因素引起的。 miRNA 是广泛存在于真核生物中的单链小分子 RNA,其不编码蛋白质,但可在转录后调控基因表达, 影响蛋白质的翻译,参与机体各种重要的生理和病理过 程。大量 miRNA 在各种生物体内被发现,其中哺乳动 物体内的 mRNA 有将近 1/3 被 miRNA 所调控
[29]

图 3 健康对照组、骨关节炎早、中、晚期组中 miR-140-3p 相 对表达量与年龄的散点图 Figure 3 Relative expression of miR-140-3p and age in normal control group, mild osteoarthritis group, moderate osteoarthritis group and severe osteoarthritis group 图注: 由散点图可见, 在健康对照组及骨关节炎组中 miR-140-3p 相对表达量与年龄间并无明显的直线相关关系。

性进一步行Pearson相关分析,结果显示:miR-140-3p 与 年 龄 的 pearson 相 关 系 数 r=-0.144 , P=0.293 , 按 α=0.05检验水准, 可以认为miR-140-3p在各膝关节液中 的相对表达量与年龄之间无直线相关关系。

。 随着

科学界对 microRNA 在调控细胞功能方面的研究日渐加 深,以及新的 microRNA 作用靶标的发现,越来越多的 研究证明,microRNA 可在多方面调控骨关节炎软骨相 关基因的表达
[29-30]

3

讨论 Discussion
膝关节骨关节炎是一种以关节软骨退行性变和关

。miR-140 是在正常软骨中特异性表
[31-33]

节周围骨质增生为病理性特征的慢性进行 性骨关节 病,相关危险因素研究一直是国内外众多专家关注的 热点
[21-23]

达的少数几个 microRNA 之一, miR-140 在斑马鱼、 小 鼠等动物的关节软骨中显示出特异性高表达 。定向 敲除小鼠体内 miR-140 基因后, 小鼠表现出与骨关节炎 类似的病理过程,表现出软骨蛋白多糖的减少和关节软 骨的纤维化, 小鼠在 12 个月时甚至出现严重软骨缺损, 但在关节软骨中过表达 miR-140 的转基因小鼠具有一 定的抵抗骨关节炎发生的效应 ,这就表明 miR-140 在 调节软骨生长和稳态过程中发挥至关重要的作用。 Miyaki 等
[34] [5]

, 其中年龄是膝骨关节炎进展强有力的预警信
[24]

号已得到充分认可,骨关节炎与年龄关系密切,随着年 龄增长骨关节炎检出率呈增高趋势 。通过分析 45 例 骨关节炎患者的年龄特征也可以发现,随着骨关节炎严 重程度的增加, 年龄呈不断增高的趋势, 这就进一步验证 了年龄增加在骨关节炎发展进程中的重要作用。 有研究显 示,年龄的变化将对 miRNA 的表达产生一定影响
[25]

,在

通过实时定量 PCR 检测 19 例骨关节炎患

小鼠年龄增长的过程中,肝组织中的 miRNA 呈上调趋势 比下调趋势明显, 在小鼠心脏衰老的过程中心脏成纤维细 胞和上皮细胞中 miR-22 的表达呈上调趋势
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[26-27]

者膝关节软骨标本中 miR-140 基因的表达, 证实骨关节 炎患者关节软骨组织中 miR-140 基因的表达明显低于 正常关节软骨。因此,miR-140 是骨关节炎发病过程中
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。尽管目

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殷春明,等. 膝骨关节炎患者关节液中 miR-140-3p 表达可反映骨关节炎进程

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的重要调控基因, 关节软骨中 miR-140 表达的变化可能 是骨关节炎进展的重要预警信号。 miR-140 由 MiR-140-3p 与-5p 组成,二者均位于 编码 E3 泛素连接酶 WWP2 基因的内含子中, 在内含子 被剪切的过程中被导出 软骨组织中的作用
[36] [35]

理委员会批准。

文章查重:文章出版前已经过 CNKI 反剽窃文献检测
系统进行 3 次查重。

文章外审:文章经国内小同行外审专家双盲外审,符
合本刊发稿宗旨。

。以往研究中均选取

miR-140-5p 作为研究对象探讨 miR-140 在软骨细胞及 。但新近的研究却发现,在骨关节
[13]

作者声明:第一作者及通讯作者对研究和撰写的论文
中出现的不端行为承担责任。论文中涉及的原始图片、数 据(包括计算机数据库 )记录及样本已按照有关规定保存、 分享和销毁,可接受核查。

炎软骨细胞中 miR-140-3p 的表达较对照组明显下调



并且对众多 miRNA 进行检测后发现在成软骨分化的骨 髓间充质干细胞和未分化的软骨细胞中 miR-140-3p 和 miR-140-5p 均处于明显的高表达水平
[14]

文章版权:文章出版前杂志已与全体作者授权人签署
了版权相关协议。

。试验通过荧

光定量 PCR 检测健康志愿者、类风湿关节炎、痛风性 关节炎及骨关节炎患者膝关节液中均有 miR-140-3p 表 达,骨关节炎组膝关节液中 miR-140-3p 的表达量为非 骨关节炎组的 9.6 倍,并且骨关节炎患者膝关节液中 miR-140-3p 的表达量随骨关节炎严重程度的增加呈相 对降低的趋势,这就说明不仅 miR-140-5p 在骨关节炎 病理过程具有重要调控作用,miR-140-3p 也可能是骨 关节炎病程进展的重要调控基因。在类风湿关节炎及痛 风性关节炎患者膝关节液中 miR-140-3p 的表达量虽较 正常对照稍有减低,但差异无显著性意义,这可能是由 于纳入的类风湿关节炎和痛风性关节炎患者膝关节病 变软骨受累较轻的原因造成的。 组织中 miRNA 不仅可以作为关键分子在细胞内调 控相关基因表达,同时也可以作为生物标志物反映机体 各种病理状况 断价值
[38] [37]

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P.O. Box 10002, Shenyang 110180 www.CRTER.org

。 关节滑液中的 miRNA 也可以用于分

析骨关节炎病理过程,并且对骨关节炎具有潜在的诊 。 miR-140-3p 在骨关节炎患者关节液中表达 明显下调,并与骨关节炎严重程度呈负相关,因此骨 关节炎患者关节液中 miR-140-3p 的表达情况可以在 一定程度上反映骨关节炎病程的进展。若经过进一步 的大样本量化分析, miR-140-3p 将有望成为早期诊断 骨关节炎的候选生物标志物,为骨关节炎早期诊治提 供依据。

致谢:在课题标本保存及实验开展过程中得到了深圳市
人民医院中心实验室的无私帮助,在此表示衷心的感谢。

作者贡献:第一作者负责实验的实施、数据收集及论文
撰写,通讯作者负责实验设计、实验指导及论文修改等。

利益冲突:所有作者共同认可文章无相关利益冲突。 伦理问题:所有研究对象均来自于深圳市人民医院,
患者签署相关知情同意书,研究经深圳市人民医院医学伦
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殷春明,等. 膝骨关节炎患者关节液中 miR-140-3p 表达可反映骨关节炎进程

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ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R

CODEN: ZLKHAH

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